FC321-AGL1农杆菌感受态
FC321-AGL1农杆菌感受态
| 产品货号 | 产品名称 | 规格 | 价格 | 促销价 |
| FC321-20 | BioGold AGL1 Chemically Competent Cell | 20×100μl | 480.00 | 398.00 |
| FC321-50 | 50×100μl | 1080.00 | 798.00 |
-70℃（12个月），不可反复冻融。
基因型：C58 RecA (rifR/carbR) Ti pTiBo542DT-DNA Succinamopine
产品说明：
AGL1菌株为C58, RecA型背景，核基因中含有筛选标签——利福平抗性基因rif和羧苄青霉素抗性基因carb，为了便于转化操作，此菌株携带一无自身转运功能的琥珀碱型Ti质粒 pTiBo542DT-DNA，此质粒含有vir基因（vir基因是T-DNA插入植物基因组必需的元件， pTiBo542DT-DNA质粒自身的T-DNA转移功能被破坏，但可以帮助转入的双元载体T-DNA顺利转移）。AGL1菌株适用于水稻、拟南芥、杨树等植物的转基因操作。本公司生产的AGL1化学转化感受态细胞经特殊工艺制作，pCAMBIA2301质粒检测转化效率>104cfu/μg DNA。
操作方法：
1.取-70℃保存的AGL1农杆菌感受态细胞于冰水浴中融化；
2.无菌条件下，向感受态细胞中加入100ng-1μg质粒DNA（第一次使用前最好做预实验确定所加质粒的最佳量），轻轻混匀，冰水浴中静置5分钟；
3.将离心管置于液氮中速冻5分钟（注：也可以用干冰和无水乙醇混合物代替液氮）；
4.然后快速将离心管置于37℃水浴中保持5分钟，不要晃动水面；
5.将离心管放回冰水浴中，冰浴5分钟；
6.无菌条件下加入800μl无抗生素的YEB或LB液体培养基，于28℃振荡培养 2~3 小时，菌体复苏；
7. 6000rpm 离心1分钟收菌，留100μl左右上清，轻轻吹打重悬菌体，取适量菌液，涂布于相应抗生素的LB平板上，于28℃培养箱中倒置培养48-72小时。
（当平板只含有50μg/ml Kan 时，28℃培养48 h即可；平板中同时加入50μg/ml Kan，20μg/ml Rif 时，需28℃培养60 h；如果使用的平板含有50μg/m Rif 则需要28℃培养72-90h）。
注意事项：
1.加入质粒时体积不应大于感受态体积的1/10；质粒不纯或存在乙醇等有机物污染，转化效率急剧下降；质粒增大一倍， 转化效率下降一个数量级。
2.混入质粒时应轻柔操作。转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。
3.平板上阳性克隆密度过大时，由于营养不足，阳性克隆生长变慢，菌落变小，为了获得大的菌落，应减少质粒用量。
4.利福平浓度不应高于25μg/ml，过高的利福平浓度不利于农杆菌生长，会降低其生长速度和转化效率。
5.培养基中加入利福平的目的是防止杂菌生长、筛选农杆菌；根据所用菌株抗性加入Ti质粒筛选抗生素可防止Ti质粒丢失，但Ti质粒筛选抗生素不利于农杆菌的转基因操作，所以一般培养农杆菌时不考虑这些抗生素，Ti质粒丢失的概率极低(可以忽略)。
备注:1、农杆菌相关抗生素配方
| 抗生素 | 配方 | 原液 | 工作液 |
| 羧苄青霉素（Carb） | 双蒸水溶解，0.22μm滤膜过滤除菌 | 50mg/ml | 50μg/ml |
| 硫酸卡那霉素（Kan） | 双蒸水溶解，0.22μm滤膜过滤除菌 | 50mg/ml | 50μg/ml |
| 链霉素（Strep） | 双蒸水溶解，0.22μm滤膜过滤除菌 | 10mg/ml | 50μg/ml |
| 利福平（Rif） | DMSO溶解，0.22μm滤膜过滤除菌 | 10mg/ml | 20μg/ml |
| 庆大霉素（Gent） | 双蒸水溶解，0.22μm滤膜过滤除菌 | 20mg/ml | 40μg/ml |
2、常用农杆菌抗性（R：抗)(S：敏感）
| 农杆菌菌株 | 羧苄青霉素(Carb) | 链霉素(Strep) | 利福平(Rif) | 庆大霉素(Gent) | 硫酸卡那霉素(Kan) |
| AGL-1 | R | S | R | S | S |
| EHA101 | S | S | R | S | R |
| EHA105 | S | S | R | S | S |
| LBA4404 | S | R | R | S | S |
| GV3101 | S | S | R | R | S |
3、LB及YEB配方
| Component | LB(液体)/L | LB(固体)/L | Component | YEB(液体)/L | YEB(固体)/L |
| Tryptone | 10 g | 10 g | Tryptone | 5 g | 5 g |
| Yeast extract | 5 g | 5 g | Yeast Extract | 1 g | 1 g |
| NaCl | 10 g | 10 g | 牛肉浸膏 | 5 g | 5 g |
| NaOH | 调PH到7.0 | 调PH到7.0 | 蔗糖 | 5 g | 5 g |
| Agar | － | 15 g | MgSO4*7H2O | 0.49 g | 0.49 g |
| NaOH | 调PH到7.0 | 调PH到7.0 | |||
| Agar | － | 15 g |
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