保存条件(保质期)：
 -70℃（12个月） 
基因型：C58 (Rif^R) Ti pMP90 (pTiC58DT-DNA) (Strep^R/Gent^R) Nopaline

产品说明
GV3101菌株为C58型背景，核基因中含有筛选标签——利福平抗性基因rif，为了便于转化操作，此菌株携带一无自身转运功能的胭脂碱型Ti质粒pMP90 (pTiC58DT-DNA)，此质粒含有vir基因 (vir基因是T-DNA插入植物基因组必需的元件，pMP90 (pTiC58DT-DNA)质粒自身的T-DNA转移功能被破坏，但可以帮助转入的双元载体T-DNA顺利转移)。pMP90 (pTiC58DT-DNA)型Ti质粒含有筛选标签：Strep/Gent，赋予GV3101菌株庆大霉素抗性，适用于拟南芥、烟草、玉米、土豆等植物的转基因操作，本公司生产的GV3101化学转化感受态细胞经特殊工艺制作，pCAMBIA2301质粒检测转化效率>10⁴cfu/μgDNA。
操作方法
1.取-70℃保存的 GV3101 农杆菌感受态细胞于冰水浴中融化；
2.无菌条件下，向感受态细胞中加入100ng-1μg质粒DNA（第一次使用前最好做预实验确定所加质粒的最佳量），轻轻混匀，冰水浴中静置 5 分钟；
3.将离心管置于液氮中速冻5分钟（注：也可以用干冰和无水乙醇混合物代替液氮）；
4.然后快速将离心管置于37℃水浴中保持5 分钟，不要晃动水面；
5.将离心管放回冰水浴中，冰浴5分钟；
6.无菌条件下加入800μl无抗生素的YEB或LB液体培养基，于28℃振荡培养 2~3 小时，菌体复苏；
7. 6000rpm 离心1分钟收菌，留 100μl左右上清，轻轻吹打重悬菌体，取适量菌液，涂布于相应抗生素的 LB平板上，于28℃培养箱中倒置培养48-72小时。
（当平板只含有50μg/ml Kan 时，28℃培养48 h即可；平板中同时加入50μg/ml Kan，20μg/ml Rif 时，需28℃培养60 h；如果使用的平板含有50μg/m Rif 则需要28℃培养72-90h）。
注意事项

1. 加入质粒时体积不应大于感受态体积的1/10；质粒不纯或存在乙醇等有机物污染，转化效率急剧下降；质粒增大一倍， 转化效率下降一个数量级。

2. 混入质粒时应轻柔操作。转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。

3. 平板上阳性克隆密度过大时，由于营养不足，阳性克隆生长变慢，菌落变小，为了获得大的菌落，应减少质粒用量。

4. 利福平浓度不应高于25μg/ml，过高的利福平浓度不利于农杆菌生长，会降低其生长速度和转化效率。

5. 培养基中加入利福平的目的是防止杂菌生长、筛选农杆菌；根据所用菌株抗性加入Ti质粒筛选抗生素可防止Ti质粒丢失，但Ti质粒筛选抗生素不利于农杆菌的转基因操作，所以一般培养农杆菌时不考虑这些抗生素，Ti质粒丢失的概率极低(可以忽略)。

备注:
1、农杆菌相关抗生素配方

 
2、常用农杆菌抗性（R：抗)(S：敏感）

3、LB及YEB配方