产品规格 
MSU440：                                                                 100μl/支
pCAMBI2301（control vector，10ng/μl )                      10μl
保存条件(保质期)：                                         -80℃（12个月）


基因型

Agrobacterium rhizogenes(str^R )  MSU440 Ri (agropine type)


产品说明

发根农杆菌是根瘤菌科(Rhizobiaceae)农杆菌属(agrobacterium)的一种革兰氏阴性土壤细菌，它能够
感染大多数双子叶植物和少数单子叶植物以及个别裸子植物。 MSU440发根农杆菌菌株含有农杆碱型
Ri质粒，具有广泛的宿主范围（玉米，烟草，茶树，青蒿等），同时具有链霉素抗性。本公司生产的 
MSU440化学转化感受态细胞经特殊工艺制作，pCAMBIA2301质粒（卡那霉素抗性）检测，转化效率
>10⁴ cfu/μg DNA。




常规操作方法
1.取-80℃保存的Ar MSU440发根农杆菌感受态于室温或手心片刻待其部分融化，处于冰水混合状态时插
入冰中。

2.每100μl感受态加入0.01-1 μg质粒DNA（转化效率较高，第一次使用前最好做预实验确定所加质粒的量）
，用手快速、剧烈拨打管底混匀或用枪吹吸混匀，依次放于冰中静置5分钟、液氮5分钟、37℃水浴5分钟、
冰浴5分钟。

3. 冰浴中拿出放室温，加入700μl 无抗生素的TY液体培养基，于28℃振荡培养2小时。
4. 6000 rpm 离心一分钟收菌，留取100μl 左右上清轻轻吹打重悬菌块涂布于含相应抗生素的TY平板上，
倒置放于28℃培养箱培养2-3天



 
● 农杆菌相关抗生素配方：
 

常用农杆菌抗性： (R：抗；S：敏感。)

● TY配方（1L）：
Tryptone                5g
Yeast extract          3g
补水到1L体积，完全溶解后，121度、20分钟高温灭菌
配制1M的氯化钙水溶液，121度、20分钟高温灭菌
每1L 灭菌的TY液体营养液中加入10ml 无菌的1M氯化钙水溶液即可。
若配制TY固体培养基，则加入15g 琼脂粉。


注意事项
1. 加入质粒时体积不应大于感受态体积的1/10；质粒不纯或存在乙醇等有机物污染，转化效率急剧下降；质粒增大一倍，转化效率下降一个数量级。
2. 混匀质粒时应用手指快速拨打管底或用枪吹吸混匀，务必使质粒快速、均匀分散开，与感受态细胞充分接触。转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。
3. 平板上阳性克隆密度过大时，由于营养不足，阳性克隆生长变慢，菌落变小，为了获得大的菌落，应减少质粒用量或降低涂板的菌量。
4. MSU440具有链霉素抗性，不可用于具有链霉素抗性质粒的转化。